金桔 
金币 
威望 
贡献 
回帖0
精华
在线时间 小时
 
 
 
 
 | 
	
 
 
 楼主 |
发表于 2020-1-9 10:15
|
显示全部楼层
 
 
 
核酸纯化柱的选择专题2:核酸纯化柱不同层(膜厚度)洗脱效率的比较;交流咨询QQ:1492876083 
 
 
 
 
核酸纯化柱的选择专题2:核酸纯化柱不同层(膜厚度)洗脱效率的比较;交流咨询QQ:1492876083  
 
  
 
本测试方法:   
 
通过质粒提取试剂盒测试不同厚度的硅胶膜,用50,100,150微升洗脱测定洗脱效率  
 
实验室设计   
 
1:选择实际层数为2,3,4,5,6,7,8,9,10层(1mm厚,相当于市场厚度的一倍,市场大多是0.5mm厚膜,可自行拆解观察厚度,不同公司厚度不一样)  
 
2:先用50微升体积洗脱测定一次浓度;然后将样品补充50微升洗脱缓冲液,将其从新加入核酸纯化柱洗脱测定浓度;第二次补充50微升洗脱缓冲液,将150微升缓冲液加入到核酸纯化柱再次洗脱测定浓度,测试硅胶膜的洗脱效率。  
 
3:起始浓度的菌液选取3mL测试(不同收集浓度的菌产量有差别,后面我们将进行测试)   
 
4:选择含PUC19质粒的DH5A菌作为提取对象。   
 
实验材料:  
 
含PUC19质粒DH5A菌株,分光光度计 。  
 
实验方法   
 
按照艾比根质粒小量提取试剂盒提取过夜培养的菌液,测定浓度。  
 
实验结果数据分析:   
 
PUC19质粒提取原始测量浓度数据:   
 
 
膜层数  
  
洗脱  
 
体积  
  
货号  
  
260/280  
  
260/230  
  
Conc. (Ng/ul)  
  
 
2层  
  
50ul  
  
P2-50/500/5000   
  
1.98   
  
2.23   
  
333.1   
  
 
3层   
  
50ul  
  
P3-50/500/5000   
  
2.03   
  
2.25   
  
260.1   
  
 
4层   
  
50ul  
  
P4-50/500/5000   
  
2.02   
  
2.24   
  
266.7   
  
 
5层   
  
50ul  
  
P5-50/500/5000   
  
2.01   
  
2.2   
  
251.9   
  
 
6层   
  
50ul  
  
P6-50/500/5000   
  
2.02   
  
2.26   
  
267.1   
  
 
7层   
  
50ul  
  
P7-50/500/5000   
  
2.02   
  
2.24   
  
268.5   
  
 
8层   
  
50ul  
  
P8-50/500/5000   
  
1.98   
  
2.19   
  
290   
  
 
9层   
  
50ul  
  
P9-50/500/5000   
  
2.0   
  
2.21   
  
272.3   
  
 
10层  
  
50ul  
  
P10-50/500/5000   
  
1.98  
  
2.18  
  
289.4  
  
 
2层   
  
100ul  
  
P2-50/500/5000   
  
2.09   
  
2.24   
  
163.5   
  
 
3层   
  
100ul  
  
P3-50/500/5000   
  
2.07   
  
2.2   
  
155.9   
  
 
4层   
  
100ul  
  
P4-50/500/5000   
  
2.1   
  
2.23   
  
166.1   
  
 
5层   
  
100ul  
  
P5-50/500/5000   
  
2.08   
  
2.21  
  
165.8   
  
 
6层   
  
100ul  
  
P6-50/500/5000   
  
2.1   
  
2.24   
  
161.7   
  
 
7层   
  
100ul  
  
P7-50/500/5000   
  
2.1   
  
2.24   
  
177.8   
  
 
8层   
  
100ul  
  
P8-50/500/5000   
  
2.07   
  
2.2   
  
177.3   
  
 
9层   
  
100ul  
  
P9-50/500/5000   
  
2.08   
  
2.21   
  
176.3   
  
 
10层  
  
100ul  
  
P10-50/500/5000   
  
2.08  
  
2.22  
  
182.5  
  
 
2层   
  
150ul  
  
P2-50/500/5000   
  
2.1  
  
2.18  
  
117.4  
  
 
3层   
  
150ul  
  
P3-50/500/5000   
  
2.11  
  
2.21  
  
111.7  
  
 
4层   
  
150ul  
  
P4-50/500/5000   
  
2.12  
  
2.24  
  
114.2  
  
 
5层   
  
150ul  
  
P5-50/500/5000   
  
2.12  
  
2.25  
  
116.3  
  
 
6层   
  
150ul  
  
P6-50/500/5000   
  
2.14  
  
2.26  
  
112  
  
 
7层   
  
150ul  
  
P7-50/500/5000   
  
2.12  
  
2.23  
  
123.1  
  
 
8层   
  
150ul  
  
P8-50/500/5000   
  
2.13  
  
2.27  
  
119.9  
  
 
9层   
  
150ul  
  
P9-50/500/5000   
  
2.15  
  
2.28  
  
122.9  
  
 
10层  
  
150ul  
  
P10-50/500/5000   
  
2.11  
  
2.25  
  
130.3  
  
 
  
 
   
 
图1 膜厚度和洗脱体积比较  
 
 
洗脱体积(图1)  
  
平均浓度(ng/ul))  
  
备注  
  
 
50ul洗脱  
  
250  
  
3ml菌液测试  
  
 
100ul洗脱  
  
150  
  
3ml菌液测试  
  
 
150ul洗脱  
  
100  
  
3ml菌液测试  
  
 
  
 
   
 
 
洗脱体积  
  
总产量  
  
备注  
  
 
50ul洗脱  
  
12  
  
3ml菌液测试  
  
 
100ul洗脱  
  
16  
  
3ml菌液测试  
  
 
150ul洗脱  
  
18  
  
3ml菌液测试  
  
 
   
 
 
洗脱体积  
  
洗脱效率  
  
备注  
  
 
50ul洗脱  
  
75%  
  
3ml菌液测试  
  
 
100ul洗脱  
  
95%  
  
3ml菌液测试  
  
 
150ul洗脱  
  
相对比较,假设100%  
  
3ml菌液测试  
  
 
  
 
结果分析及建议:  
 
对于需要50ul洗脱体积的建议选择P2-P5厚度的膜,可以满足高浓度要求。  
 
 
对于洗脱体积大于50建议选择p6-10的膜,产量增加。  
 
 
其它厚度的刻自行研究测试。  
 
 
不同菌液和质粒提取含量有所差别,具体选择生产企业可自行测试。  
 
 
50ul洗脱效率大致75%,100ul洗脱效率大致95%。建议洗脱体积控制50-100ul左右,可增加洗脱效率。  
 
 
 |   
 
 
 |