微球与抗体偶联，“啪”一下就共价结合了？

这些答案，都在告诉我们，羧基纳米微球，通过共价键与抗体结合，而共价键是最牢固的化学键。

这正确吗？正确！

这有问题吗？有问题！

问题在于，上述的答案只能在理论中成立，而且容易让研发人员在工程实践中走入定向思维的误区。在工程实践中，纳米羧基微球与抗体偶联的过程和产物，远非上述示意图那么简单直接。

最重要的一点是，羧基微球即使在NHS/EDC存在下，依然会有大量抗体以物理吸附的形式与之结合。这是显而易见的，共价结合的前提是两个物质的基团能够足够靠近，这种距离下必然产生物理吸附，甚至比例还不小。我们可以做个实验，即在无NHS/EDC的环境下加入抗体与羧基微球或磁珠进行孵育，所得到的产物也必然产生足够的信号。

微球的均一性也是我们要考虑的。完美的球型和均一的粒径只会存在示意图，和厂家的宣传手册上，像这样：

但实际上，绝大部分的微球，都是以非球型存在，而且大小各式各样，毫无章法，像这样：

微球的羧基含量也容易糊住人，让我们产生每个微球都是均一的羧基含量这种错觉。羧基含量是通过单位体积的微球溶液经电位滴定得到的参数，它不是每个微球的参数，而是测定电位时那一群微球所代表的参数。

因此，在工作中，既要有理论的指导，也更要关注实践过程中的现象。在微球的筛选中，得到批间差小、均一性好的原料至关重要！